發(fā)布時(shí)間： 2025-02-10 點(diǎn)擊次數(shù)： 466次
1.材料準(zhǔn)備
底板及墊料選擇：選取合適的底板，如塑料或硬質(zhì)紙板等，作為檢測(cè)卡的基礎(chǔ)支撐。同時(shí)準(zhǔn)備樣品墊、玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜和吸水墊等材料，確保它們的質(zhì)量符合要求且相互匹配。
抗體與配體準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好玉米赤霉烯酮的特異性抗體、羊抗鼠抗體（用于質(zhì)控線包被）、熒光微球標(biāo)記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體以及相關(guān)的抗原、偶聯(lián)劑等生物試劑。這些試劑的活性和純度對(duì)檢測(cè)卡的性能至關(guān)重要。
化學(xué)試劑與緩沖液配制：配置各種所需的化學(xué)試劑，如碳二亞胺（EDC）、N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）等用于蛋白偶聯(lián)反應(yīng)；準(zhǔn)備不同 pH 值的緩沖液，如磷酸鹽緩沖液（PBS）、MES 緩沖溶液等，用于調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的酸堿度。
2.硝酸纖維素膜處理
檢測(cè)線包被：將玉米赤霉烯酮半抗原-載體蛋白偶聯(lián)劑通過(guò)特定的方法固定在硝酸纖維素膜上，形成檢測(cè)線。例如，先將玉米赤霉烯酮半抗原溶解于 DMF 中，加入 EDC，然后將制得的溶液逐滴緩慢滴加到溶解有 BSA 的 CB 溶液中，攪拌反應(yīng)后，再用 PBS 透析，得到 ZEAO 偶聯(lián)產(chǎn)物，將其包被于硝酸纖維素膜上形成檢測(cè)線。
質(zhì)控線包被：將羊抗鼠抗體包被于硝酸纖維素膜上，形成質(zhì)控線，以監(jiān)測(cè)檢測(cè)過(guò)程中試劑的有效性和操作的正確性。
3.乳膠微球與抗體偶聯(lián)
乳膠微球預(yù)處理：在乳膠微球中加入 MES 緩沖溶液，混勻后離心洗滌，去除雜質(zhì)和未反應(yīng)的基團(tuán)。
抗體偶聯(lián)：按照一定的比例將 NHS 和 EDC 加入到乳膠微球中，混勻后孵育一段時(shí)間，使乳膠微球表面活化。然后離心洗滌、去上清液，加入 ZEA 抗體至終濃度為 0.6mg/mL，混勻后反應(yīng)一段時(shí)間。再次離心去除上清，用 2％的 BSA 進(jìn)行封閉和清洗，最后將乳膠微球懸浮于儲(chǔ)存緩沖溶液中，混勻并保存于冰箱中備用。
4.組裝與干燥
組件粘貼固定：將樣品墊、已包被好的硝酸纖維素膜和吸水墊依次粘貼固定在底板上，確保各組件之間緊密連接且位置準(zhǔn)確，避免出現(xiàn)氣泡或縫隙。各組件的長(zhǎng)度和搭接寬度需符合設(shè)計(jì)要求，以保證檢測(cè)過(guò)程中液體能夠順利通過(guò)毛細(xì)管作用在各組件間流動(dòng)。
干燥處理：將組裝好的檢測(cè)卡在一定溫度下進(jìn)行烘干過(guò)夜處理，使各組件之間的粘貼更加牢固，同時(shí)也有利于去除殘留的水分和有機(jī)溶劑。
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